據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國(guó)每年有大約7000萬(wàn)病人接受手術(shù)**。然而，隨著快速康復(fù)外科等理念的提出，患者術(shù)后疼痛、惡心嘔吐已被較好的控制，但外科及麻醉科醫(yī)師常常忽略了患者術(shù)前焦慮。據(jù)報(bào)道，患者行擇期手術(shù)術(shù)前焦慮的發(fā)生率可達(dá)80%，而在近期我國(guó)的一項(xiàng)多中心研究也發(fā)現(xiàn)患者高度焦慮的發(fā)生率高達(dá)25.9%。
焦慮癥(Anxiety disorder)是較為常見(jiàn)的一種以焦慮、緊張等焦慮情緒為主的神經(jīng)癥，多呈陣發(fā)性或者持續(xù)性發(fā)作。有研究發(fā)現(xiàn)術(shù)前焦慮不僅可增加術(shù)中、術(shù)后對(duì)啊片類**的需求，從而增加術(shù)后并發(fā)癥，甚至增加某些手術(shù)術(shù)后的死亡率和發(fā)病率，并且可延緩乳腺癌患者術(shù)后的恢復(fù)。此外，一項(xiàng)前瞻性隊(duì)列研究認(rèn)為全髖關(guān)節(jié)置換術(shù)患者術(shù)前焦慮HADS-A評(píng)分大于7分可明顯增加患者術(shù)后發(fā)生譫妄的發(fā)生率，且可以以**術(shù)前焦慮為切入點(diǎn)從而減少術(shù)后譫妄。更值得一提的是，術(shù)前明顯焦慮的患者渴望可以得到醫(yī)師積極的支持**。因此，如何更好診治術(shù)前焦慮癥成為亟待解決的問(wèn)題。
目前心理**和****是常用來(lái)**焦慮癥的方案。心理**周期很長(zhǎng)且主觀和客觀因素對(duì)其影響較大。而****目前也存在許多的**反應(yīng)及局限性，如引起認(rèn)知功能損害、肝功能損害、產(chǎn)生**依賴與軀體戒斷狀態(tài)等。那么是否有更多的方法來(lái)促使患者術(shù)前焦慮狀態(tài)得以緩解呢?
術(shù)前飲食療法對(duì)**或緩解患者術(shù)前焦慮鮮見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。稻谷籽粒中的大米胚芽是一種富含蛋白質(zhì)、脂肪、多種維生素以及礦物質(zhì)的大米加工副產(chǎn)品，重量約占稻谷的2%~2.2%，占糙米的2.6%~2.9%。其中蛋白質(zhì)含量達(dá)22.5%上，尤其是人體必需氨基酸苯丙氨酸、賴氨酸、纈氨酸*多，B維生素含量也相當(dāng)豐富且以維生素B1、維生素B2和尼克酸為主。日本三枝等發(fā)現(xiàn)大米胚芽中含量豐富的γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid，GABA)約為0.3%，并且大米胚芽可通過(guò)自身脫梭酸的反應(yīng)快速大量地產(chǎn)生。富含γ-氨基丁酸的大米胚芽對(duì)**、抑郁癥、植物神經(jīng)紊亂有一定的作用，而大米胚芽的抗焦慮作用鮮見(jiàn)報(bào)道。
因此，本課題將建立小鼠焦慮模型，并運(yùn)用明暗箱實(shí)驗(yàn)初步探討大米胚芽粉對(duì)小鼠的抗焦慮作用。該實(shí)驗(yàn)結(jié)論有望為外科手術(shù)患者術(shù)前飲食或者診療方案提供建議，并為臨床焦慮癥患者診療提供新的思路。
1材料與方法
1.1材料
1.1.1動(dòng)物:健康雄性ICR小鼠99只，4周齡，清潔級(jí)，體質(zhì)量16~20g，由福建醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。室溫(20±2)℃，濕度40%~70%，光照12h(6∶00~18∶00)和黑暗12h(18∶00~6∶00)環(huán)境。動(dòng)物飼養(yǎng)于標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)籠內(nèi)，每周換籠2次，飼養(yǎng)3周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。自由飲水?dāng)z食，預(yù)適應(yīng)環(huán)境3d后，稱重并隨機(jī)分組進(jìn)入正式實(shí)驗(yàn)。
1.1.2藥品與試劑:無(wú)菌生理鹽水(500mL);D西泮注射液，臨用前打開(kāi)，用生理鹽水配制成2mg·kg-1 D西泮溶液;
1-(3-氯苯基)哌嗪?jiǎn)嘻}酸鹽(1-(3-chlorophenyl)piperazine monohydrochloride，MCPP)，臨用前稱重將粉末溶于生理鹽水，配制成0.005%，0.01%，0.02%，0.04%MCPP溶液;75%醫(yī)用酒精;米胚粉，與正常飼料混合制成高劑量(含40%大米胚芽粉)、中劑量(含10%大米胚芽粉)、低劑量(含2.5%大米胚芽粉)飼;儀器明暗箱(LDB):由黑色和透明亞克力板制成，包括三部分:較大部分2/3為明箱區(qū)，上方有透明頂蓋，較小部分1/3為暗箱區(qū)，上方有黑色頂蓋，兩箱體隔板正中央有通道。距離地面2m處放置攝像機(jī)，記錄小鼠在明暗箱的行為。
明暗箱/黑白箱實(shí)驗(yàn)，XR-XB120，上海欣軟
1.2方法
1.2.1建立ICR小鼠焦慮模型:正常雄性ICR小鼠35只，按體重隨機(jī)分為5個(gè)組(生理鹽水組，MCPP0.25mg·kg-1組，MCPP0.50mg·kg-1組，MCPP1.00mg·kg-1組，MCPP2.00mg·kg-1組)，每組7只，各組均自由飲水?dāng)z食，飼養(yǎng)一周后于第8天8∶00~14∶00進(jìn)行明暗箱實(shí)驗(yàn)。所有小鼠均應(yīng)于實(shí)驗(yàn)前一日運(yùn)送到行為學(xué)實(shí)驗(yàn)室，適應(yīng)環(huán)境，減少動(dòng)物緊張。每只小鼠實(shí)驗(yàn)前20min按體重(5mL·kg-1)進(jìn)行腹腔注射，生理鹽水組注射無(wú)菌生理鹽水，4個(gè)劑量組分別注射0.25mg·kg-1，0.50mg·kg-1，1.00mg·kg-1，2.00mg·kg-1的MCPP溶液，腹腔注射完成后20min依次進(jìn)行明暗箱實(shí)驗(yàn)。
將小鼠放入暗箱正中，頭部對(duì)著通道口方向，迅速蓋上蓋子，觀察5min。觀察指標(biāo)包括:明箱停留時(shí)間以及明箱與暗箱之間的穿梭次數(shù)，其中小鼠在明暗箱中一次探索行為的開(kāi)始或結(jié)束的標(biāo)準(zhǔn)是:以小鼠四足完全進(jìn)入明箱或暗箱。測(cè)試前將每只小鼠放入一個(gè)35cm×10cm×5cm籠中，任其自由探究5min后，迅速將小鼠從籠內(nèi)取出(小鼠背向?qū)嶒?yàn)者)，放置在實(shí)驗(yàn)裝置中，打開(kāi)攝像系統(tǒng)，記錄小鼠在實(shí)驗(yàn)裝置內(nèi)的活動(dòng)，時(shí)間為5min;*后，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后將小鼠放回籠內(nèi)，**留在裝置上的糞便和尿液，并用75%醫(yī)用酒精溶液擦拭，待酒精揮發(fā)完全或用干布擦干后再進(jìn)行下一只小鼠的測(cè)試。
1.2.2探討米胚粉對(duì)小鼠焦慮癥的作用:正常雄性ICR小鼠50只，按體重隨機(jī)分為5個(gè)組，每組7~11只，即MCPP1.0mg·kg-1組、陽(yáng)性對(duì)照藥D西泮組、低劑量組、中劑量組、高劑量組，各組均自由飲水?dāng)z食，于第8天8∶00~14∶00做明暗箱實(shí)驗(yàn)(方法同上)。陽(yáng)X藥D西泮組需在實(shí)驗(yàn)前30min先行腹腔注射D西泮溶液(2mg·kg-1)，所有動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)測(cè)試前20min按體重(5mL·kg-1)分別腹腔注射1.00mg·kg-1MCPP溶液。
1.2.3中劑量米胚粉對(duì)正常ICR小鼠的影響:正常雄性ICR小鼠14只，按體重隨機(jī)分為2個(gè)組，每組7只，即生理鹽水組、中劑量組，中劑量組喂食中劑量米胚粉，各組均自由飲水?dāng)z食，于第8天8∶00~14∶00做明暗箱實(shí)驗(yàn)(方法同上)。兩個(gè)劑量組在實(shí)驗(yàn)前20min按體重(5mL·kg-1)分別腹腔注射無(wú)菌生理鹽水溶液，觀察5min。
1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理根據(jù)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中記錄的詳細(xì)數(shù)據(jù)資料，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，數(shù)據(jù)處理用單因素方差分析(ANVOA)進(jìn)行多組間比較，兩組間采用t檢驗(yàn)，數(shù)值采用x±s表示，P＜0.05為差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2結(jié)果
2.1不同劑量MCPP對(duì)ICR小鼠明暗箱實(shí)驗(yàn)的影響用不同濃度的MCPP往小鼠腹腔注射后，讓小鼠在明暗箱中自由探索，檢測(cè)小鼠在明箱停留時(shí)間和穿梭次數(shù)。結(jié)果顯示與生理鹽水組相比，0.25mg·kg-1，0.50mg·kg-1，1.00mg·kg-1，2.00mg·kg-1的MCPP溶液均能夠減少小鼠在明箱停留時(shí)間，但是只有MCPP1.00mg·kg-1劑量組對(duì)小鼠明箱停留時(shí)間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，其余劑量組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，各劑量組未呈現(xiàn)出劑量--反應(yīng)關(guān)系，而呈現(xiàn)出平緩的“u”型曲線。與生理鹽水組相比，MCPP0.25mg·kg-1、0.50mg·kg-1劑量組對(duì)小鼠穿梭次數(shù)都有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05);而MCPP1.00mg·kg-1劑量組對(duì)小鼠穿梭次數(shù)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異更顯著(P＜0.01);MCPP2.00mg·kg-1劑量組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。綜上所述，明暗箱致焦慮模型造模成功，MCPP1.00mg·kg-1劑量組統(tǒng)計(jì)學(xué)差異更顯著，致焦慮模型的效果更明顯，所以MCPP1.00mg·kg-1為小鼠明暗箱致焦慮模型實(shí)驗(yàn)*適濃度(見(jiàn)圖1)。
2.2不同劑量米胚粉對(duì)ICR小鼠明暗箱實(shí)驗(yàn)的影響用MCPP1.0mg·kg-1往小鼠腹腔注射后，讓小鼠在明暗箱中自由探索，檢測(cè)小鼠在明箱停留時(shí)間和穿梭次數(shù)。結(jié)果顯示與MCPP1.0mg·kg-1組相比，低、中、高劑量組均能夠增加小鼠在明箱停留時(shí)間，但只有中劑量組對(duì)小鼠明箱停留時(shí)間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，D西泮組對(duì)小鼠明箱停留時(shí)間統(tǒng)計(jì)學(xué)差異更顯著(P＜0.01)，低、高劑量組對(duì)小鼠明箱停留時(shí)間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，三個(gè)劑量組未呈現(xiàn)出劑量--反應(yīng)關(guān)系，卻呈現(xiàn)出神經(jīng)藥理實(shí)驗(yàn)特有的鐘型曲線。與MCPP1.0mg·kg-1組相比，D西泮劑量組對(duì)小鼠穿梭次數(shù)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，其余三個(gè)劑量組對(duì)小鼠穿梭次數(shù)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。綜上所述，雖然中劑量組只增加小鼠明箱停留時(shí)間，幾乎與D西泮組相當(dāng)，未增加穿梭次數(shù)，但是明暗箱實(shí)驗(yàn)中明箱停留時(shí)間對(duì)小鼠焦慮作用效果優(yōu)于穿梭次數(shù)，所以中劑量米胚粉有一定的抗MCPP所致的小鼠焦慮癥狀(見(jiàn)圖2)
2.3中劑量米胚粉對(duì)正常ICR小鼠明暗箱實(shí)驗(yàn)的影響結(jié)果用無(wú)菌生理鹽水往小鼠腹腔注射后，讓小鼠在明暗箱中自由探索，檢測(cè)小鼠在明箱停留時(shí)間和穿梭次數(shù)。結(jié)果顯示與生理鹽水組相比，中劑量組對(duì)小鼠明箱停留時(shí)間和穿梭次數(shù)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，所以中劑量米胚粉與生理鹽水在明暗箱實(shí)驗(yàn)中停留明箱時(shí)間和穿梭次數(shù)無(wú)明顯區(qū)別，表明中劑量米胚粉對(duì)正常小鼠無(wú)致焦慮作用(見(jiàn)圖3)。
3討論
明暗箱實(shí)驗(yàn)是測(cè)試小鼠是否焦慮的經(jīng)典實(shí)驗(yàn)，可反應(yīng)小鼠的活動(dòng)度以及焦慮情緒。本實(shí)驗(yàn)采用明暗箱實(shí)驗(yàn)觀察小鼠的焦慮行為，從而判斷小鼠是否發(fā)生焦慮癥狀。相關(guān)實(shí)驗(yàn)指標(biāo)的觀察與計(jì)算主要依靠實(shí)驗(yàn)者來(lái)人工操作，會(huì)因?yàn)閷?shí)驗(yàn)者的主觀性而產(chǎn)生結(jié)果偏倚，后期實(shí)驗(yàn)室將配備實(shí)驗(yàn)動(dòng)物視頻行為分析系統(tǒng)，來(lái)提高焦慮動(dòng)物實(shí)驗(yàn)自行處理實(shí)驗(yàn)結(jié)果的能力和效率，還能觀察計(jì)算許多人工無(wú)法觀測(cè)的指標(biāo)。
在小鼠致焦慮模型明暗箱實(shí)驗(yàn)中，MCPP1.00mg·kg-1劑量組對(duì)小鼠明箱停留時(shí)間和穿梭次數(shù)都有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而且與其他劑量組相比差異更顯著，致焦慮模型效果更好，說(shuō)明明暗箱致焦慮模型造模成功，因此可以選用MCPP1.00mg·kg-1為小鼠明暗箱致焦慮模型實(shí)驗(yàn)的*適濃度。本實(shí)驗(yàn)在致焦慮模型建立過(guò)程中表現(xiàn)出了有效性、可靠性、實(shí)用性，因此繼續(xù)選用明暗箱致焦慮模型實(shí)驗(yàn)的*適濃度，對(duì)小鼠進(jìn)行造模產(chǎn)生焦慮癥狀，探討大米胚芽粉對(duì)抗MCPP所致焦慮癥的作用。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，雖然中劑量組對(duì)小鼠明箱停留時(shí)間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而對(duì)穿梭次數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但是明暗箱實(shí)驗(yàn)中明箱停留時(shí)間對(duì)小鼠焦慮作用效果優(yōu)于穿梭次數(shù)，其中中劑量的作用效果略遜于D西泮，顯示中劑量大米胚芽粉對(duì)小鼠焦慮行為有確切的**作用，所以中劑量米胚粉有一定的抗MCPP所致的小鼠焦慮癥的作用。在實(shí)驗(yàn)中各劑量組并未出現(xiàn)相應(yīng)的劑量--反映關(guān)系，呈現(xiàn)出神經(jīng)藥理實(shí)驗(yàn)特有的鐘型曲線，說(shuō)明米胚粉在抗MCPP所致的小鼠焦慮癥狀中，并不是劑量越高越好，初期可能抗焦慮效果隨著劑量的增加而提高，達(dá)到頂峰后，隨著劑量的增加效果逐步下降，可能趨于穩(wěn)定，亦或是米胚粉自身有致焦慮作用，所以進(jìn)行下一步中劑量米胚粉對(duì)致焦慮的實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:與生理鹽水組一樣，中劑量組注射生理鹽水后對(duì)小鼠明箱停留時(shí)間和穿梭次數(shù)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，所以中劑量米胚粉與生理鹽水在明暗箱實(shí)驗(yàn)中停留明箱時(shí)間和穿梭次數(shù)無(wú)明顯區(qū)別，表明米胚粉無(wú)致焦慮作用。明暗箱實(shí)驗(yàn)結(jié)果假陽(yáng)性可能性大，因此評(píng)估需結(jié)合運(yùn)動(dòng)功能。明暗箱實(shí)驗(yàn)中一般抗焦慮劑會(huì)增加明暗箱明箱行為活動(dòng);而致焦慮劑則相反。通過(guò)明箱停留時(shí)間百分率來(lái)反映抗焦慮療效，因此焦慮程度與明箱停留時(shí)間百分率成反比。
文章來(lái)源：福建醫(yī)科大學(xué)附屬協(xié)和醫(yī)院/福建醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院 劉培昌，馬小賓等老師所發(fā)表的《探討大米胚芽粉對(duì) ICR 焦慮癥小鼠的抗焦慮作用》，文章編號(hào): 1006-3765( 2021) -10-0016-05
對(duì)實(shí)驗(yàn)設(shè)備有興趣的小伙伴可以聯(lián)系知鼠達(dá)理の劉工18221718071
動(dòng)物行為分析軟件：
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VisuTrack軟件
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SuperMaze軟件
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FishTrack斑馬魚(yú)分析軟件
動(dòng)物行為儀器：
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自身給藥、條件恐懼、斯金納、震驚反射（PPI）、跑步機(jī)、各類經(jīng)典迷宮等
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動(dòng)物抓撓分析儀、動(dòng)物震顫行為分析儀、動(dòng)物捕食行為分析儀
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動(dòng)物主動(dòng)步態(tài)分析、動(dòng)物被動(dòng)步態(tài)分析、動(dòng)物自由步態(tài)分析（內(nèi)測(cè)中）
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睡眠剝奪儀、體溫維持儀、智能熱板儀、轉(zhuǎn)棒疲勞儀、鼠尾光照測(cè)痛儀等
神經(jīng)電生理：
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光遺傳、無(wú)線光遺傳
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光纖記錄系統(tǒng)（單通道、多通道）
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電生理信號(hào)采集系統(tǒng)（腦電、肌電等）
