目的探討社會失貶應(yīng)激抑郁模型建立的可行性及有效性。

方法連續(xù)給予C57BL/6小鼠社會失敗心理應(yīng)激21 d，應(yīng)激結(jié)束24 h后依次通過社會交互實臉、開場實臉、糖水偏愛實臉等評價手段，對小鼠進(jìn)行抑郁行為評價。結(jié)果與對照組相比，社會失效應(yīng)激導(dǎo)致C57BL/6小鼠出現(xiàn)顯著焦慮樣行為，而僅有50% -60%的社會失敗應(yīng)激小鼠出現(xiàn)社會逃避及興趣缺失的抑郁樣行為，表現(xiàn)為應(yīng)激易感。其他應(yīng)激小鼠評價結(jié)果與時照組無差異，未出現(xiàn)抑郁樣行為，表現(xiàn)出應(yīng)激杭性。結(jié)論通過社會失致應(yīng)激，為建立一種新的抑郁動物模型提供了實臉依據(jù)。

關(guān)鍵詞:社會失敗;易感表型;抑郁;模型，動物;應(yīng)激;杭抑郁藥

    抑郁癥是個體遺傳素質(zhì)與生存環(huán)境共同作用所導(dǎo)致的慢性多因性精神**之一，全球發(fā)病率高達(dá)20%，具有高復(fù)發(fā)率特征?；颊卟坏钯|(zhì)量受到嚴(yán)重影響，還可能導(dǎo)致**等極端行為，給社會帶來巨大的醫(yī)療和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。目前，對抑郁癥的病理生理機(jī)制還了解甚少。生活中應(yīng)激事件作為誘發(fā)抑郁癥的重要原因之一是公認(rèn)的事實。然而，群體中大部分個體在遭遇不幸或者重大應(yīng)激事件后，仍然能保持正常的心理和認(rèn)知功能，對應(yīng)激表現(xiàn)出回復(fù)性，并不誘發(fā)抑郁癥。從這個角度上來看，研究個體本身對應(yīng)激抗性的分子和細(xì)胞機(jī)制，可能為亟待闡明的抑郁癥和抗抑郁作用病理生理學(xué)提供重要途徑和思路。目前，國內(nèi)外對于應(yīng)激抗性的分子機(jī)制研究相對較少，其中原因之一就在于當(dāng)前通常采用的抑郁動物模型具有一定的局限性。

    本研究中，通過對C57BL/6小鼠施加社會失敗心理應(yīng)激并經(jīng)行為學(xué)評估，可將應(yīng)激群體篩分為應(yīng)激易感和非易感兩個亞群。在應(yīng)激易感亞群中，小鼠出現(xiàn)顯著社會逃避和興趣缺失的抑郁樣行為，同時伴有顯著焦慮行為;在應(yīng)激非易感亞群中，小鼠僅出現(xiàn)顯著焦慮行為，并沒有出現(xiàn)社會逃避和興趣缺失的抑郁樣行為，行為上表現(xiàn)出顯著應(yīng)激抗性。究竟是何種原因?qū)е孪嗤瑧?yīng)激所產(chǎn)生的行為水平的差異還有待深入探討。近來有學(xué)者報道，腦獎賞環(huán)路中腦邊緣多巴胺神經(jīng)元，可能介導(dǎo)了社會失敗應(yīng)激所致的應(yīng)激易感性及抗抑郁作用，也為本研究中采用社會失敗建立動物抑郁模型結(jié)構(gòu)有效性、表觀有效性和預(yù)測有效性的探討提供了一定的基礎(chǔ)。通過社會失敗應(yīng)激模型，不僅可以建立穩(wěn)定的用于研究抑郁病理生理學(xué)的動物模型，同時還能對應(yīng)激抗性個體展開分子和細(xì)胞機(jī)制的研究。

材料和方法

1.1實驗動物

    6-7周齡清潔級雄性C57 BL/6小鼠購自**醫(yī)學(xué)科學(xué)院動物中心;8 -9月齡雄性退休齡CDl種鼠購自北京維通利華實驗動物公司;進(jìn)食飲水不限，室溫(23土2)`C，日光燈照明7:00一19: 00，應(yīng)激時間為16:00一18: 30，行為學(xué)評價時間為8: 00一12:000

1.2藥品與試劑

    蔗糖購自西隴化工股份有限公司(批號:1001202);無水乙醇購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司(批號:40021292)。

1.3方法

1. 3.1社會失敗應(yīng)激實驗前將小鼠隨機(jī)分為對照組和應(yīng)激組，每天將應(yīng)激組C57BL/6小鼠作為侵人者放入長期單獨飼養(yǎng)CDl小鼠的籠內(nèi)，進(jìn)行身體接觸10 min,10 min內(nèi)C57 BL/6小鼠將受到CDl小鼠攻擊并表現(xiàn)出逃跑、恐懼、順從等從屬性特征。10 min身體接觸后，使用透明并且有很多小孔的有機(jī)玻璃板將二者隔開進(jìn)行心理應(yīng)激24 h，保證C57 BL/6小鼠能看到CDl小鼠，聽到CDl小鼠的聲音，而且能聞到CD1小鼠的氣味，應(yīng)激持續(xù)21 d。

應(yīng)激結(jié)束后，將C57 BL/6小鼠單獨飼養(yǎng)，進(jìn)行行為學(xué)評價。對照組則使用等當(dāng)量的鼠籠飼養(yǎng)，2只對照組C57BL/6小鼠成對隔開，并且每天將每只小鼠放置于掌心30 s。待應(yīng)激組應(yīng)激結(jié)束后，對照組小鼠也進(jìn)行單獨飼養(yǎng)。

1.3.2開場實驗將小鼠置于42 cm x 42 cm x 25cm的曠場中心處，任其自由活動5 min。實驗全程使用攝像系統(tǒng)記錄，記錄小鼠5min內(nèi)穿過中央?yún)^(qū)域的次數(shù)和總運動距離。視頻采用上海欣軟SuperMaze軟件進(jìn)行分析。每只小鼠實驗完畢后均使用75%乙醇對曠場進(jìn)行擦拭并徹底干燥，避免對下一只小鼠的實驗產(chǎn)生影響。

1.3.3社會交互實驗社會交互實驗分為兩個階段，每個階段2. 5 min。實驗在42 cm x 42 cm x 25crn開場內(nèi)進(jìn)行。**階段將C57 BL/6小鼠隨機(jī)放置到所預(yù)定義的交互區(qū)域遠(yuǎn)端的兩個角落處，交互區(qū)域內(nèi)放置一個3 cm x 6 cm x 25 cm的布滿小孔的塑料透明小盒，盒內(nèi)不放置CDl小鼠。**階段，向透明小盒內(nèi)放置一只CDl小鼠，再將C57 BL/6小鼠放回到開場內(nèi)，觀察C57BL/6小鼠與CDl小鼠的交互情況。實驗過程使用攝像系統(tǒng)記錄，并使用上海欣軟SuperMaze軟件對小鼠在預(yù)定義的交互區(qū)域內(nèi)的停留時間和交互區(qū)域遠(yuǎn)端兩角落處停留的時間及其運動軌跡進(jìn)行分析。

1.3.4糖水偏愛實驗社會失敗應(yīng)激進(jìn)行至第19天即給予C57 BL/6小鼠2瓶飲用水，供其選擇性飲用，適應(yīng)2d后，再換成2瓶1%的蔗糖溶液，同樣再選擇性地適應(yīng)2d。選擇性飲水共進(jìn)行Sd后，正式進(jìn)行糖水偏愛實驗，給予小鼠一瓶飲用水和一瓶1%蔗糖溶液，24 h后，稱量各水瓶消耗量。測試共行2d，每天將飲用水瓶和蔗糖溶液瓶位置互換，消除位置偏愛可能帶來的誤差。

1.3.5統(tǒng)計方法所有數(shù)據(jù)以表示，采用t檢驗、單因素方差分析及兩因素析因設(shè)計進(jìn)行顯著性檢驗。組間比較采用Dunnet t檢驗。顯著性檢驗水平設(shè)置為P<0.01

2結(jié)果

2.1社會失敗應(yīng)激對小鼠社會交互的影響

    在小鼠社會交互**階段實驗中，即開場內(nèi)透明小盒有CDl小鼠存在時，與對照組和社會失敗應(yīng)激非易感組比較，應(yīng)激易感組小鼠在與CD1小鼠交互區(qū)域遠(yuǎn)端的兩個角落處停留時間顯著增長(p<0. 01)，而在與CDl小鼠接觸進(jìn)行社會交互的區(qū)域處停留時間顯著縮短(P<0.01)，表現(xiàn)出明顯的社會逃避抑郁行為。在實驗中，可直接觀察到C57BL/6小鼠看到CD1小鼠時表現(xiàn)出明顯的恐懼反應(yīng)，并迅速逃離至遠(yuǎn)端角落，呼吸急促。相反地，經(jīng)受等量應(yīng)激的非易感C57BL/6小鼠在與CD1小鼠交互區(qū)域遠(yuǎn)端的兩個角落處停留時間及社會交互的區(qū)域處停留時間與對照組無差異，表現(xiàn)為主動接觸CD1小鼠的積極主動地社會交互行為(圖1)。

2. 2社會失敗應(yīng)激對小鼠開場實驗的影響

    在開場實驗中，與對照組比較，社會失敗應(yīng)激小鼠運動距離顯著縮短(P<0.01)，而在場內(nèi)的4個角落處停留時間較長(圖2A)，并且進(jìn)人中央?yún)^(qū)域活動的次數(shù)也顯著下降(P<0.01)，主動探索行為減少(圖2B)。應(yīng)激易感組與非易感組在運動距離和進(jìn)入中央?yún)^(qū)域活動次數(shù)無差異，表明社會失敗應(yīng)激導(dǎo)致小鼠均出現(xiàn)焦慮樣行為。

2. 3社會失敗應(yīng)激對小鼠糖水偏愛的影響

    在糖水偏愛實驗中，結(jié)果與社會交互行為結(jié)果一致。與對照組和社會失敗應(yīng)激非易感組比較，應(yīng)激易感組小鼠蔗糖水消耗量占總飲水量的比率顯著下降(P<0.01)，表現(xiàn)為明顯地興趣缺失抑郁行為。而應(yīng)激非易感組蔗糖水消耗量占總飲水量的比率與對照組無差異，蔗糖飲水量相對較多，表現(xiàn)出明顯地糖水偏愛行為，未出現(xiàn)興趣缺失的行為(圖3)。

3討論

    應(yīng)激是導(dǎo)致抑郁癥發(fā)生的重要原因之一。在對抑郁癥的病理生理研究中，國內(nèi)外較常采用的動物模型是慢性溫和應(yīng)激、獲得性無助和社會失敗應(yīng)激模型。盡管獲得性無助和慢性溫和應(yīng)激都能達(dá)到長時性的行為學(xué)、神經(jīng)分泌和神經(jīng)生物學(xué)的效應(yīng)變化，但是這兩種建模方式一定程度上屬于非社會性應(yīng)激。通常，誘發(fā)人類抑郁癥的生理心理發(fā)生變化應(yīng)激源多屬于社會性應(yīng)激，因此，采用社會失敗應(yīng)激，更好地模擬人類抑郁癥的發(fā)生方式，建立動物模型對于探索抑郁癥的病因?qū)W是很有必要的。另外，Covingto等Krish~等的報道表明，社會失敗應(yīng)激所導(dǎo)致興趣缺失和社會逃避的抑郁行為是長久潛伏的，通過慢性而不是急性的抗抑郁**可以糾正社會失敗應(yīng)激所致的抑郁行為，我們的相關(guān)研究結(jié)果也與此一致(將另文報道)。

    抑郁癥是一種異質(zhì)性**，患者可表現(xiàn)出多種癥狀，包括抑郁情緒、無價值感、興趣缺失、悲觀絕望、反復(fù)的**念頭、**或嗜睡等。通常抑郁癥患者并不會表現(xiàn)所有抑郁癥癥狀，因此，一個理想的動物抑郁模型也并不需要具有所有不正常的抑郁相關(guān)行為。興趣缺失是抑郁癥的核心癥狀之一，目前多數(shù)動物抑郁模型的建立均將出現(xiàn)興趣缺失做為抑郁行為評價的一個重要指標(biāo)。在本研究中，我們通過采用社會失敗應(yīng)激，導(dǎo)致應(yīng)激小鼠出現(xiàn)探索行為能力下降，社會逃避行為顯著提高，蔗糖飲水偏愛下降的抑郁樣行為，表明了該應(yīng)激方式可以很好地模擬人類社會性應(yīng)激誘發(fā)抑郁癥的實際情況，同時體現(xiàn)出社會失敗應(yīng)激建立抑郁行為動物模型的表觀有效性。

    本研究中，等量社會失敗應(yīng)激組的小鼠，在應(yīng)激后進(jìn)行行為學(xué)評價發(fā)現(xiàn)，同一群體在承受同等心理應(yīng)激的情況下，僅50%一60%小鼠會由應(yīng)激效應(yīng)導(dǎo)致抑郁癥行為的產(chǎn)生，而出現(xiàn)社會逃避和興趣缺失行為，而其他小鼠卻表現(xiàn)正常，未出現(xiàn)上述抑郁行為。對實驗結(jié)果進(jìn)行分析后認(rèn)為，這種情況的出現(xiàn)與人類抑郁癥發(fā)生的情況是一致的。如前文所述，抑郁癥是一種異質(zhì)性**，在同一群體中，雖然可能所處環(huán)境相同，應(yīng)激效應(yīng)一致，但是由于個體之間遺傳水平存在差異，同等應(yīng)激并非產(chǎn)生同一結(jié)果。盡管目前尚未鑒定出“抑郁基因”，但是**的發(fā)生與遺傳和環(huán)境的相互作用是不爭的事實，抑郁癥的發(fā)生也不例外。因此，在我們的社會失敗應(yīng)激實驗中，有40% -50%的小鼠未出現(xiàn)社會逃避與蔗糖偏愛的興趣缺失行為，即群體中部分小鼠出現(xiàn)應(yīng)激抗性的而未致抑郁的結(jié)果是正常且必然的。該結(jié)果與Krishnan等在2007年的報道也是一致的，較好地模擬了抑郁癥的某些核心表現(xiàn)，同時也能對應(yīng)激抗性的個體遺傳基礎(chǔ)的研究提供一定的實驗依據(jù)。在采用社會失敗應(yīng)激研究應(yīng)激抗性的細(xì)胞與分子機(jī)制方面，Wilkinson,Lagace和Vialou等已有相關(guān)報道，例如，Vialou等證明小鼠轉(zhuǎn)錄因子△E'osB介導(dǎo)了社會失敗應(yīng)激的應(yīng)激抗性機(jī)制。這些研究較為客觀地體現(xiàn)了采用社會失敗應(yīng)激建立動物抑郁模型在闡明抑郁癥病理生理研究中所具有的研究價值和動物模型建立的預(yù)測有效性。

    綜上所述，應(yīng)激是誘發(fā)抑郁癥的重要原因之一。缺乏可靠有效的抑郁動物模型是探索抑郁癥生理病理機(jī)制的主要障礙。社會失敗應(yīng)激建立抑郁樣行為動物模型的研究，為動物抑郁行為新模型的建立提供了一定的實驗依據(jù)，同時，也為抑郁癥機(jī)制的研究中提供了一種新的研究思路和方向。一方面，對抑郁動物進(jìn)行分子細(xì)胞機(jī)制的探討，另一方面對應(yīng)激產(chǎn)生抗性的個體本身的抗性機(jī)制展開研究。這種并行的研究策略有助于抑郁癥分子細(xì)胞機(jī)制的闡明，也能為研發(fā)更多高效、持續(xù)的抗抑郁**提供研究基礎(chǔ)。