摘要：目的 研究抗郁丸對慢性溫和不可預(yù)見性應(yīng)激（CUMS）抑郁癥大鼠行為學(xué)及血清中甲 狀腺**、細(xì)胞因子的影響，探討抗郁丸**抑郁癥的作用機(jī)理。 方法 采用慢性溫和 不可預(yù)見性應(yīng)激結(jié)合孤養(yǎng)方法構(gòu)建 CUMS 大鼠模型。 60 只雄性大鼠隨機(jī)分為正常組（10 只）和模型 組（50 只），模型組造模 3 周后，隨機(jī)分為模型對照組、丙咪嗪組及抗郁丸低、中、高劑量組，每組 10 只，記錄大鼠體重及糖水消耗量變化，并進(jìn)行開場行為檢測、強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)及懸尾實(shí)驗(yàn)。 給藥 8 周后處死大鼠，腹主動(dòng)脈取血，分離血清，測定大鼠血清中甲狀腺**及細(xì)胞因子含量。 結(jié)果 模型對照組大鼠體重增長減慢， 糖水消耗量減少， 行為運(yùn)動(dòng)得分降低， 強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間 及 懸 尾 不 動(dòng) 時(shí) 間 延 長 （P＜0．05 ） ， 血 清 中 四 碘 甲 狀 腺 激 素 氨 酸 （T4） 、 促 甲 狀 腺 激 素 （TSH ） 含 量 降 低 （P＜0．05 ） ， 白 介 素 1β （IL－1β ） 、 腫 瘤 壞 死 因子（TNF－α）及 IL－6 含量升高（P＜0．05），與正常組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 抗郁丸及丙咪嗪可加快模型大鼠的體重增 長 ，增 加 糖 水 消 耗 量 ，增 加 行 為 學(xué) 得 分 ，縮 短 強(qiáng) 迫 游 泳 不 動(dòng) 時(shí) 間 及 懸 尾 不 動(dòng) 時(shí) 間 （P＜0．05），并 提 高 血 清 中 T4及TSH 含 量 （P＜0．05 ） ， 不 同 程 度 降 低 IL－1β 、TNF－α 及 IL－6 水 平 （P＜0．05 ） ， 與 模 型 對 照 組 相 比 差 異 有 統(tǒng) 計(jì) 學(xué) 意 義 。結(jié)論 抗郁丸能改善 CUMS 大鼠抑郁癥狀，逆轉(zhuǎn)抑郁癥大 鼠 血 清 中 甲 狀 腺 激 素 及 細(xì) 胞 因 子 的 含 量 ，這 可 能 是 其 發(fā)揮抗抑郁作用的重要機(jī)制之一。

關(guān)鍵詞：慢性溫和不可預(yù)見性應(yīng)激；抑郁癥；甲狀腺**；細(xì)胞因子

抑郁癥是一種由于身體某些器官功能紊亂或長期失落心境而引起的慢性應(yīng)激病理狀態(tài)，其發(fā)病率高、發(fā)病年齡廣泛，嚴(yán)重威脅人們的健康和生命，導(dǎo)致沉重的社會(huì)負(fù)擔(dān)。 資料顯示，全球抑郁癥發(fā)病率為 4．2％， 中國高達(dá) 6．9％， 并且以 11．3％的增長率逐年增加。 據(jù)預(yù)測到 2020 年抑郁癥將上升為全球**大**負(fù)擔(dān)。 因此，對抑郁癥發(fā)病機(jī)制及**的探討成為世界關(guān)注的重點(diǎn)。 目前臨床常用**包括三環(huán)類、四環(huán)類、神經(jīng)遞質(zhì)類抑制劑、單胺氧化酶抑制劑等，但由于副作用大、療效不理想、依從性差制約了臨床應(yīng)用。 而抑郁癥是一種典型的生物、心理、社會(huì)等多因素作用導(dǎo)致的**，可引起人體多系統(tǒng)的病理反應(yīng)，因此多層次、多靶點(diǎn)的中醫(yī)

**具有一定的潛力和優(yōu)勢。 根據(jù)傳統(tǒng)的疏肝解郁名方，我們開發(fā)出的抗郁丸以抗抑郁為主，兼有健脾**、養(yǎng)血柔肝、清熱除煩、養(yǎng)心**之功效，本 實(shí) 驗(yàn) 通 過 慢 性 溫 和 不 可 預(yù) 見 性 應(yīng) 激 （chronicunpredictable mild stress，CUMS）結(jié)合孤養(yǎng)方式構(gòu)建大鼠抑郁癥模型，研究抗郁丸對抑郁癥的功效，并以三 碘 甲 狀 腺 氨 酸 （triiodothyronine，T3）、 四 碘 甲 狀 腺氨酸 （tetraiodothyronine，T4）、 促甲狀腺**（thyroid-stimulating hormone，TSH） 以 及白介素-1β （interleukin

1β，IL-1β）、IL-6、腫瘤壞死因子 （tumor necrosis factorα，TNF-α）為觀測指標(biāo) ，初步探討其作用機(jī)理 。

1 材 料與方法

1．1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造模及分組 選用 SPF 級(jí) 健康雄性SD 大 鼠 60 只 ，體 重 （200±10）g，由中山大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，許可證號(hào)為 SCXK（粵）2011－0029。 適應(yīng)性飼養(yǎng) 1 周后，根據(jù)體重隨機(jī)分為正常組（n＝10）和模型組（n＝50），正常組 5 只 ／ 籠飼養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)中不受任何刺激，模型組單籠飼養(yǎng)，采用 CUMS 法，每天隨機(jī)進(jìn)行一種應(yīng)激：禁食（24 h）、禁水（24 h）、夾尾（1min）、 晝夜顛倒 、 潮濕墊料 （ 墊料 ： 水 ＝1∶1）、 鼠籠傾斜 （45°）、冰 水 游 泳 （4℃，5 min）、合 籠 （5 只 ／ 籠 ，24h），前后兩天刺激不能相同 ，使大鼠不能預(yù)料刺激的發(fā)生種類，避免產(chǎn)生適應(yīng)現(xiàn)象。 造模 3 周后，將模型組大鼠根據(jù)體重隨機(jī)分為模型對照組 （雙蒸水 5ml ／ kg）、丙咪嗪組 （15 mg ／ kg）、抗郁丸低劑量組 （144mg ／ kg）、 中劑量組 （288 mg ／ kg）、 高劑量組 （576 mg ／kg），每組 10 只，各組每日灌胃一次 ，從 第 4 周 開始 ，連續(xù)給藥 8 周，給藥同時(shí)繼續(xù)進(jìn)行刺激。

1．2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器 抗郁丸 ， 由無限極 （ 中國 ）有限公司研發(fā)中心提供的復(fù)合藥，0．6 g ／ 片，主要成分為當(dāng)歸、川芎、陳皮、香附、白芍。低、中、高劑量組大鼠的給藥劑量分別按照相當(dāng)于**使用量的 0．5倍、1 倍、2 倍計(jì)算，配置成相應(yīng)濃度的混懸液（144、288、576 mg ／ kg），4℃ 冰箱保存?zhèn)溆?。 丙咪嗪 （ 廣州市 天 騏 生 物 科 技 有 限 公 司 ），劑 量 15 mg ／ kg，蔗 糖（廣州輝旺實(shí)驗(yàn)儀器有限公司 ），用大鼠日常飲用水

配置成 1％濃度溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配。 T3ELISA 檢測試劑盒、T4ELISA

檢測試劑盒、TSH ELISA 檢測試劑盒、IL-1β ELISA 檢測試劑盒、TNF-α ELISA 檢測試劑盒、IL-6 ELISA 檢測試劑盒 （廣州市一科生物科技有限公司）。開場實(shí)驗(yàn)敞箱（100 cm×100 cm×40 cm）、強(qiáng)迫游泳玻璃缸（35 cm×35 cm×50 cm）由上海欣軟信息科技有限公司定制；電子分析天平（Mettle Toledo，Swiss）， 低溫高速離心機(jī) （Eppendorf， Germany），Elx800 酶 聯(lián) 免 疫 檢 測 儀 （ELX800Bio-TecInstruments）。

1．3 各種行為學(xué)檢測

1．3．1 體重測量與糖水消耗量 測量 于同等條件下每周進(jìn)行 1 次體重及糖水消耗量測定。 適應(yīng)性飼養(yǎng)的 1 周對大鼠進(jìn)行 1％糖水偏好訓(xùn)練， 每籠并排放置 2 個(gè)水瓶，兩瓶均為糖水放置 24 h，隨后一瓶糖水， 一瓶純水放置 24 h， 再經(jīng)過 24 h 禁食禁水后，進(jìn)行**次糖水消耗量基線測定，造模開始后的每周在固定時(shí)間測定一次，測定時(shí)均為單籠。 以1 h 糖水消耗量為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 。

1．3．2 開場行為實(shí)驗(yàn) 于造模前 、 造模 3 周后 、 給藥 8 周后用開場實(shí)驗(yàn)箱進(jìn)行行為學(xué)觀察。 開場實(shí)驗(yàn)箱 100 cm×100 cm×40 cm，周壁 為 黑 色 ，底 面 用 白線劃分為面積相等的 25 個(gè)小方格。 將單只大鼠置于光潔開場實(shí)驗(yàn)箱中央，以動(dòng)物穿越地面方塊數(shù)為水平運(yùn)動(dòng)得分（四爪均進(jìn)入的方格才計(jì)數(shù)），以直立次數(shù)為垂直運(yùn)動(dòng)得分（兩前爪騰空或攀附周壁），以4 min 內(nèi)大鼠行為學(xué)得分為評(píng)價(jià)指標(biāo) 。

1．3．3 強(qiáng) 迫游泳實(shí)驗(yàn) 在大鼠造模前 、 造模 3 周后、給藥 8 周后在同等條件下進(jìn)行，共 3 次。 取一強(qiáng)迫游泳玻璃缸，加水深

30 cm 左右，水溫穩(wěn)定在室溫，將大鼠輕放水中適應(yīng) 2 min 后連續(xù)觀察 4 min，以 4 min 內(nèi)大鼠累計(jì)漂浮不動(dòng)時(shí)間為評(píng)價(jià)指標(biāo)。

1．3．4 懸 尾實(shí)驗(yàn) 在大鼠造模前 、 造模 3 周 后 、 給藥 8 周后在同等條件下進(jìn)行， 共 3 次。 將 SD 大鼠尾端 2 cm 處固定于水平面上，使其呈倒掛狀態(tài)，頭部離臺(tái)面約 30 cm，四周以板隔離動(dòng)物視線，適應(yīng) 2min 后 觀察 4 min 內(nèi)的累計(jì)不動(dòng)時(shí)間 （不 動(dòng)指標(biāo)為大鼠除呼吸外所有肢體均不動(dòng)）。

1．4 血清中甲狀腺**及細(xì)胞因子含量測定 大鼠于連續(xù)給藥 8 周后，采用腹主動(dòng)脈取血 5 ml，4℃10 000 r ／ min 離 心 10min，

分 離 血 清 ， 置 于 －80° 冰箱保存待測， 采用 ELISA 方法檢測血清中 T3、T4、TSH 及 IL-1β 、TNF-α 、IL-6 的含量 。

1．5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分 析 采用 SPSS 17．0 軟 件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以（x±s）表示，兩組間比較采用 t 檢驗(yàn)，多組間比較采用方差分析，兩兩分析采用 LSD檢驗(yàn)，P＜0．05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

     型號(hào)：XR-XQ202

3 討 論

20 世紀(jì) 60 年代開始 ， 人們針對抑郁癥發(fā)病機(jī)制的**神經(jīng)遞質(zhì)假說，試圖通過**誘發(fā)神經(jīng)遞質(zhì)功能紊亂來建立相應(yīng)的動(dòng)物模型

，主要包括有 5-羥色胺酸（5-HTP）誘導(dǎo)甩頭行為、利血平拮抗模型、高劑量阿撲**拮抗 模 型 等 ，但 藥 物 誘 導(dǎo)的抑郁模型與人類抑郁癥的發(fā)病機(jī)制相差甚遠(yuǎn)，且抑郁癥狀較單一。 情志異常是抑郁癥的主要病因，情志病因的實(shí)質(zhì)是**生活事件形成的心理應(yīng)激，因此用慢性心理應(yīng)激的方法制作抑郁癥模型比較符合臨床實(shí) 際 ，本 實(shí) 驗(yàn) 參 考 Willner 等 提 出 的 慢性溫和不可預(yù)見性應(yīng)激程序并加以改進(jìn)，結(jié)合孤養(yǎng)方式構(gòu)建大鼠 CUMS 抑郁癥模型，這與人類抑郁癥中慢性、低水平的應(yīng)激源導(dǎo)致抑郁癥發(fā)**展的機(jī)制更接近，糖水消耗是衡量動(dòng)物對獎(jiǎng)賞的敏感缺乏和快感消失的客觀有效指標(biāo)，抑郁癥臨床表現(xiàn)雖復(fù)雜多樣，但其核心癥狀的實(shí)質(zhì)是快感缺乏，糖水消耗量的減少，不僅較好地模擬人類抑郁癥的核心癥狀，而且操作簡便，重復(fù)性好，較敏感。 研究結(jié)果顯示，造模 3

周后，模型組大鼠糖水消耗量減少，體重增長緩慢，各種行為出現(xiàn)異常改變，與正常組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義， 因此認(rèn)為 CUMS 抑郁癥模型造模成功，結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致。 經(jīng)過抗郁丸連續(xù) 8 周的**，抑郁癥大鼠的糖水消耗量增加，體重增長加快， 抑郁行為得以一定改善， 說明抗郁丸對CUMS 誘導(dǎo)的抑郁癥大鼠具有一定的抗抑郁功效 。甲狀腺功能和抑郁癥的關(guān)系一直受到人們的關(guān)注，但結(jié)論尚不明確。 Whybrow 等學(xué)者提出甲狀腺功能與抑郁癥有關(guān)，

該學(xué)說指出甲狀腺功能低下者，血中 T3、T4含量下降，可降低抑郁癥發(fā)生的閾值，更易發(fā)生抑郁。 陳丹等在探討甲狀腺功能亢進(jìn)與抑郁癥關(guān)系的臨床觀察中發(fā)現(xiàn)， 在甲亢初期，T3、T4水平較高時(shí)患者表現(xiàn)為高代謝癥， 抑郁癥的發(fā)病率極低，在甲亢的**過程中

，隨著病情的好轉(zhuǎn) ， 血 清 中 T3、T4水 平 下 降 ， 抑 郁 癥 的 發(fā) 病 率 由6．8％ 增 加至 51％ ， 進(jìn) 一步**后 ， 甲狀腺水平正常或偏低，甚至出現(xiàn)甲狀腺減退時(shí)，抑郁癥的發(fā)病率超過 50％，表明甲狀腺**的動(dòng)態(tài)下降參與抑郁癥的形成及病程變化。 而趙博等實(shí)驗(yàn)表明抑郁癥大鼠血清 T4、TSH 呈 升高趨勢 ； 陳寶忠等 研 究顯示抑郁大鼠 T4含量降低，T3、TSH 無 明顯差異 ；佟海英等研究中，抑郁癥大鼠 T3含量升高，TSH 含量降低； 本實(shí)驗(yàn)中模型對照組大鼠血清中 T4、TSH 含 量降低，抗郁丸可上調(diào)降低的 T4、TSH 水 平 。

甲狀腺**水平與抑郁癥之間不一致的研究結(jié)論，折射出兩者之間復(fù)雜的相關(guān)性， 而甲狀腺**水平高低不一，除了與甲狀腺**自身的分泌調(diào)節(jié)受多種因素影響相關(guān)外，還可能與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種屬和性別、造模刺激方式和強(qiáng)度、造模時(shí)間、采血時(shí)間等因素有一定的關(guān)聯(lián)性。“抑郁癥的細(xì)胞因子假說 ” 為探討抑郁癥的機(jī)制和**抑郁癥提供了一個(gè)新的視角，越來越多證據(jù)表明細(xì)胞因子和抑郁癥的發(fā)生之間存在密切聯(lián)系。 多項(xiàng)臨床試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，相對于非抑郁癥患者而言，抑郁癥患者外周血液中炎癥細(xì)胞因子呈高水平過表達(dá)狀態(tài)，經(jīng)**后抑郁癥狀緩解時(shí)細(xì)胞因子含量降低趨于正常水平。 Wang 等研究表明，注射細(xì)胞因子誘導(dǎo)劑的小鼠出現(xiàn)了體重下降、糖水消耗減少等抑郁樣行為，抗抑郁藥**后其癥狀明顯好轉(zhuǎn)。 Thierno 等對心肌梗死后的抑郁大鼠進(jìn)行**后，大鼠的抑郁病態(tài)明顯改善，同時(shí)血液中炎性細(xì)胞因子水平下降。 本實(shí)驗(yàn)經(jīng)檢測模型組抑郁大鼠血清中 IL-1β 、TNF-α 及 IL-6 含量升高，抗郁丸治 療 后 能 有 效 降 低 IL-1β、TNF-α 及 IL-6 的 過 表達(dá)，改善抑郁行為。 細(xì)胞因子在抑郁癥的發(fā)生中可能的機(jī)制為：通過神經(jīng)***功能介導(dǎo)、通過神經(jīng)遞質(zhì)代謝介導(dǎo)、通過神經(jīng)元細(xì)胞的功能介導(dǎo)。 過度激活的細(xì)胞因子進(jìn)入腦內(nèi)相應(yīng)區(qū)域，造成神經(jīng)***功能的紊亂、神經(jīng)遞質(zhì)代謝障礙等一系列異常改變，在抑郁癥的病理過程中發(fā)揮重要作用。

綜上所述，抗郁丸能改善 CUMS 大鼠的抑郁癥狀，逆轉(zhuǎn)甲狀腺**和細(xì)胞因子的異常水平，提示其可能是通過調(diào)節(jié)下丘腦－垂體－甲狀腺軸分泌功能、調(diào)節(jié)炎癥細(xì)胞因子表達(dá)從而發(fā)揮抗抑郁功效。