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酸棗仁湯對高架十字迷宮大鼠行為學(xué)影響的量效關(guān)系評價機(jī)制

摘要 :采用國際通用的高架十字迷宮焦慮動物模型(EPM),從行為學(xué)角度觀察了四個不同給藥劑 量酸棗仁湯對EPM大鼠的抗焦慮作用 。 結(jié)果顯示 ,酸棗仁湯確有抗焦慮作用 ,但此效應(yīng)不隨給藥劑量的增加而增強(qiáng), 與一般化學(xué)**所遵循的量效關(guān)系規(guī)律不同 。
關(guān)鍵詞 :酸棗仁湯 ;EPM ;行為學(xué) ;量效關(guān)系

      型號:XR-XG201-M

酸棗仁湯是臨床**肝血不足 、虛熱內(nèi)擾之“虛勞虛煩不得眠”的有名古 方 ,有關(guān)本方藥理實(shí)驗(yàn)方面的研究目前多局限于**催眠作用的初步觀察。針對本方臨床可用于**焦虛癥的經(jīng)驗(yàn)事實(shí),本文采用國際上通用的焦慮動物模 型—(EPM ,高架十字迷宮模型),從行為學(xué)角度觀察了酸棗仁湯的抗焦慮作 用 ,并對其量效關(guān)系特點(diǎn)進(jìn)行了初步總結(jié)。
1 材 料
1.1 動物健康雄性Wistar 大鼠90只,級別 SPF/VA F ,體重180±10g,許可 證號 :SCXK (京 )2002.0003,北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物中心提供 。所有動物提前一周購入,本實(shí)驗(yàn)室常規(guī)飼養(yǎng)。
1.2 藥 物
1.2.1 酸棗仁湯 (SZR T) :由酸棗仁18g、知母10g、茯苓 10g、川芎 5g、甘草3g 組成 (參考高等中醫(yī)院校五版《方劑學(xué)》教材) ,全部藥材購自北京 同仁堂有限公司 。 常規(guī)方法煎煮后經(jīng)水提制成150%濃度 ,分裝**后4 攝氏度保存?zhèn)溆谩?br> 1.2 .2 D ZP (D ia z epam Tablets,***片 ) :京衛(wèi)藥準(zhǔn)字(1996) 第 154011號 ,北京益民制藥廠出品 。 ***36 片 ,研缽粉碎后以雙蒸水溶 解 ,加入2 %羧甲基纖維素鈉1~2 滴充分混勻 ,配成10%濃度 。 4 攝氏度保存 ,使用前混搖均勻 。
1.3 行為學(xué)測試儀器大鼠高架十字迷宮(EPM ) :采用國際通用方法制作。由兩個相對的開放臂(open aim ,長X 寬分別為50cm X 10cm ) 、兩個相對的封閉臂 (enclosed arm ,clos e aITI1,長 X 寬 ×高 分 別 為50cm ×10cm ×40cm ) 、一個連接四只臂的中央平臺(central platform , 10cm ×10cm ) (即 :開放臂一中央平臺一開放臂或封閉臂一 中央平臺一 封閉臂 ,此二者互 相垂直成為“十”(plus) 形狀 )和圍繞在開放臂邊緣的1cm高的矮擋板組成 (目的是防止動物在探究過程中不慎滑下迷宮) 。 本迷宮由國產(chǎn)有機(jī)玻璃制 作(8mm厚,上海欣軟信息科技有限公司提供) . 有機(jī)玻璃部分整體固定于(由黑色等長寬 的“十”木架和不銹鋼可升降底座組成的)支架上,使迷宮底板調(diào)節(jié)到距實(shí)驗(yàn)室 地面50cm處 。
2 方 法
2 .1 動 物 處 置 及 分組 大 鼠每 籠 7 ~8 只 ,不 限食水 。 光 照 節(jié) 律 12L :12D (6:00 ~18:00 ) ,室 溫 (18 ±2 ) ℃ ,保 持 安 靜 。 將 大 鼠隨 機(jī) 分 為 空 白對 照 、D ZP 、SZRT I 、 II 、 m 、 IV 共 6 組 ,每 組 15 只。 其 中 中 藥I 、 Ⅱ、 Ⅲ、 Ⅳ組 分 別 按 3.75g/ kg/ d、7.5g/ kg/ d、 15g/kg/ d 、30g/ kg/ d 給 予 SZR T 灌 胃 ,DZP 組 給 予 1mg/ kg灌 胃 ,空 白對 照 組 灌 服 等容 積 的生 理 鹽 水 。 各組 連續(xù)給 藥 10d,于 第 10d 在 末 次 給 藥 2h 后 8:o0 ~14 :00A m 做行 為測 試 。 所有 動物 均 提前 2h 進(jìn) 入 測 試 實(shí)驗(yàn)室 。
2 .2 行 為學(xué)測 試
2 .2 .1 測 試 條 件 實(shí) 驗(yàn) 室 內(nèi)光 線 昏暗 (以 1.5m 距離處 能 區(qū)分 大 鼠細(xì) 微 活 動 的 * 低亮 度 為 準(zhǔn) ) 并 保 持恒亮 ,室溫 20~C 左 右 ,保 持 安 靜 。 測 試 箱 放 置 于 實(shí)驗(yàn)室 一 角 ,周 圍布 以 2m 高 黑色單 調(diào) 背景 。 實(shí) 驗(yàn)過 程中有 一名人 員 搬 運(yùn) 動 物 ,2 名 事 先 經(jīng) 過 實(shí) 驗(yàn) 記 錄 培訓(xùn)但 不 熟 悉 分組 情 況 的人 員在 距 離 測試 箱 1.5m 處分別 觀察 記 錄動 物 的活動 。
2 .2 .2 測試 指 標(biāo) 迷 宮 測 試 前 將 每 只 大 鼠 放 入 一個 60cm ×60cm ×35cm 塑 料盒 中,任 其 自由探 究 5min后迅 速 置于 EPM 的中 央平 臺處 ,使 其 頭 部 正對 其 中 一 個 開放 臂 ,釋放 后 即開始 記 錄下述 指標(biāo) :①進(jìn) 入 開放 臂次數(shù) (open arln entry , OE ) :進(jìn) 入到任一 開放 臂 的次 數(shù) ,以 大 鼠 四個 爪 子 均 進(jìn) 入 到 臂 內(nèi)為 準(zhǔn) ,中途 一個 爪 子 從 該 臂 中 完全 退 出則 為 該 次 進(jìn)入活 動 完 成 ; ② 進(jìn) 入 開 放 臂 時 間 (open arln tim e,OT) :進(jìn) 入 開放臂 的 時間 ,單 位 :秒 ; ③ 進(jìn) 入封 閉 臂 次數(shù) (cl0se ariB entr y , CE ) :進(jìn) 入 到任 一 封 閉臂 的 次數(shù) ,以大 鼠 四個 爪子 均進(jìn) 入 到 臂 內(nèi) 為準(zhǔn) ; ④ 進(jìn) 入 封 閉臂時間 (cl0se arln time, CT ) :進(jìn) 入封 閉臂 的時 間 ,單 位 :秒 ; ⑤ 向下 探 究 次 數(shù) (head— dipping) :大 鼠置 身 于 中央平 臺或 開放 臂 時 ,一 邊 用 前 爪 握 住 迷 宮邊 緣 一 邊把頭部 和肩部 伸 出開放 臂 的邊緣 向迷宮 下 面探 究 的行 為次數(shù) ; ⑥ 封 閉臂 后腿 直 立 次數(shù) (rearing) :大 鼠在封 閉臂 前腿 抬起 以后 腿支 持使 身體 豎立 的次數(shù) 。由① ~④分 別 計(jì) 算 出 :① 進(jìn) 入 開放 臂 和封 閉 臂的總次 數(shù) (OE + CE ) :表示 大 鼠的運(yùn) 動 活力 (1ocom otoractivitv) :②進(jìn) 入 開放 臂 次 數(shù) 比例 (OE % ) : 即 開放 臂進(jìn) 入次 數(shù)/ (OE + CE ) ×100 % ;③ 開放 臂 停 留 時 間 比例 (O T%) ,即開放 臂 停 留時間/ (OT 十 CT ) ×100 %。每 只大 鼠測試 5m in。 中 間用 濕 布 擦 拭 迷 宮 ,**糞 便 ,繼用 干布擦 凈 后再進(jìn) 行下 一 只大 鼠的測試 。
2 .3 數(shù)據(jù) 的統(tǒng) 計(jì)處 理 所得 數(shù)據(jù) 均用 SPSS l1.0 forwindow s軟 件 統(tǒng) 計(jì) 處 理 ,采 用 單 因素 方 差 分 析 (one—w ay A N O V A ) 進(jìn)行 檢驗(yàn) 。

 

4 討 論
酸棗仁湯 (SZR T) 現(xiàn)代臨床除****癥外 ,還用于以情緒或神志障礙為主要表現(xiàn)的精神神經(jīng)系統(tǒng)**。焦慮癥是一種以廣泛和持續(xù)焦慮或反復(fù)發(fā)作的驚恐不安為主要特征的神經(jīng)癥 ,常伴以頭暈、胸悶、心悸等植物神經(jīng)功能癥狀和運(yùn)動性緊張 ,一般屬于中醫(yī)“ 心神不寧”的范 疇 ,臨證可從調(diào)神角度辨治 。SZRT 具有養(yǎng)心** 、清熱除煩功效,與目前中醫(yī)**焦慮癥的基本治法相吻合 ,其在精 神**方面 的臨床有效運(yùn)用也提示本方可能具有潛在的抗焦慮效用。
本研究引入的高架十字迷宮模型 ,為抗焦慮研究中公認(rèn)的非條件反射模型。 它利用動物對新異環(huán)境的探究特性相對高懸敞開臂的恐懼心理,形成動物的矛 盾行為 ,實(shí)驗(yàn)指標(biāo)以進(jìn)入開放臂的百分?jǐn)?shù)(O E %) 和在開放臂停留時間的百 分?jǐn)?shù) (O T% )反映動物的焦慮狀態(tài) ,焦慮動物的 O E %和 OT %明 顯 降低 ,經(jīng)典抗焦慮**則使兩者升高;開放臂和中央平臺區(qū)head—dipping 次數(shù)則反映了在非保護(hù)區(qū)內(nèi)的探索行為 ,代表動物對陌生環(huán)境的好奇探究或因恐懼而尋求逃避,與焦慮程度有一定相關(guān)性;開放臂和封閉臂總進(jìn)入次數(shù)反映動物總的運(yùn)動能力 ,封閉臂 rearing值也 可用來觀察**有無**作用及**強(qiáng)度 ,但多年來關(guān)于抗焦慮藥究竟如何影響這兩個指標(biāo)一直存在爭議 。
本實(shí)驗(yàn)觀察到: SZRT 7.5g/kg 可顯著增加EPM大鼠OE%和OT%值 ,明顯 提 高大 鼠在 開 放 臂 和 中央平 臺 區(qū) head— dipping次數(shù)及封閉臂的 rearing值 ;15g/kg SZRT 可增加EPM大鼠 OE %和 head— dipping次數(shù) ,但對OT %影響不明顯 ; 與空白對照組比較 ,SZ R T 3 .75g/kg 、30g/ kg對 O E % 、 O T % 、head.dipping和 rearing 影響均不明 顯 。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明 : SZRT 在7 .5g/ kg ~15g/ kg 劑量范圍內(nèi) ,具 有一定的抗焦慮效應(yīng) ,與DZP的作用方向一致 ,從對EPM大鼠各項(xiàng)指標(biāo)影響 結(jié)果看 , 以7.5g/kg 劑量效果*優(yōu) ,而在3 .75/kg及 3Og/kg 劑量 時SZRT幾乎不表現(xiàn)抗焦慮效用 。
本研究證 實(shí) :中藥酸棗仁湯確有抗焦慮作用 .從小劑量開始此效用逐漸增 強(qiáng),但達(dá)到一定劑量后 ,抗焦慮效應(yīng)并不再伴隨劑量的增加而增強(qiáng) ,這與一 般化學(xué)**所遵循的量效關(guān)系規(guī)律不同,其發(fā)生機(jī)制尚有待進(jìn)一步研究 。

滬公網(wǎng)安備 31011202007432號

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