摘 　要 : 　目的 　 探討T迷宮實(shí)驗(yàn)對(duì)焦慮模型小鼠行為的影響。方法 　 采用逐日遞增法 , 皮下注射啡形成小鼠依賴后 , 給予納絡(luò)酮催促 , 建立啡戒斷后焦慮模型。采用“三陰交”電針**和 T 迷宮行為學(xué)測(cè)試的方法 , 觀察針刺對(duì)啡戒斷后焦慮小鼠的焦慮情緒和腦內(nèi)去甲腎上腺素 ( N E) 含量變化的影響。 結(jié)果 　 1.針刺可使戒斷后焦慮模型小鼠在閉臂滯留時(shí)間縮短 ( P < 0.05) , 在開臂滯留時(shí)間延長(zhǎng) ( P < 0.05) ; 2.針刺能明顯降低模型組小鼠腦組織 N E ( P <0.01) 含量。 結(jié)論 　針刺可抑制啡戒斷后所致的焦慮癥狀 , 其抗焦慮效應(yīng)可能與針刺調(diào)節(jié)焦慮模型小鼠腦內(nèi) N E 的釋放有關(guān)。

關(guān)鍵詞 :針刺療法 ; 啡戒斷 ; 焦慮 ; 去甲腎上腺素 ; T迷宮

　　焦慮是對(duì)**類物質(zhì) ( 如***等) 依賴的患者所反映的重要戒斷癥狀和稽延性癥狀 , 患者復(fù)吸和覓藥行為與焦慮呈正相關(guān)。臨床研究已經(jīng)證明 ,針刺不僅有較好的脫毒**效果 ,而且對(duì)啡戒斷后的焦慮也有良好的改善作用。但是 ,對(duì)于針刺的這一作用機(jī)理 , 目前卻未見研究報(bào)告發(fā)表。為認(rèn)識(shí)針剌對(duì)啡戒斷后焦慮作用的機(jī)理 , 本實(shí)驗(yàn)采用 T - 迷宮焦慮模型 , 觀察了針刺對(duì)小鼠啡依賴模型戒斷后焦慮癥狀的調(diào)整及腦內(nèi) N E 的影響 ,并對(duì)針刺抗啡戒斷后焦慮的神經(jīng)生物學(xué)機(jī)制 ,進(jìn)行了初步探討。

1 　材料和方法

1.1 　材料

1.1.1 　動(dòng)物選用昆明種小鼠 50 只 , 雄性 , 體重 18 g ± 1.2g 。( 動(dòng)物及飼料均由成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供) 。動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)前馴養(yǎng) 1 周 , 動(dòng)物房溫度、濕度分別維持在 20 ℃、 70 %左右。

1.1.2 　藥品和試劑

鹽酸啡注射液 ( morp hine hydrochloride) 由沈陽(yáng)**制藥廠提供 ,批號(hào) 930503 。鹽酸納絡(luò)酮注射液 ( naloxone ,NL X ) ,由益橋 ( 湖南) 制藥有限公司提供 , 批號(hào) 950920 。N E 標(biāo)準(zhǔn)品 :Sigma Chemical Co 。

1.1.3 　儀器與設(shè)備

T - 迷宮 , 參照文獻(xiàn)制作 ，由上海欣軟信息科技有限公司提供; 熒光分光光度計(jì)( RF - 510 型 ,日本島津) ; 韓氏電針**儀。T迷宮實(shí)驗(yàn)對(duì)焦慮模型小鼠行為的影響

1.2 　方法

1.2.1 小鼠啡依賴模型的建立

小鼠按照隨機(jī)分組的原則 ,分為完全空白組 ( 簡(jiǎn)稱空白組) ; 迷宮空白組 ( 簡(jiǎn)稱迷空組) ; 模型組 ; 模型加電針組 ( 簡(jiǎn)稱模針組) ; 單純電針組 ( 簡(jiǎn)稱單針組) 。每組 10 只。

A. 空白組 : 除每天在相同的時(shí)間進(jìn)行與其他組相同的方法固定外 ,不做任何處理。

B. 迷空組 : 每天除進(jìn)行和空白組相同的處理外 ,再加迷宮實(shí)驗(yàn)。

C. 模型組 : 造模方法參照文獻(xiàn)進(jìn)行 : 以小鼠熱板法鎮(zhèn)痛 ED50 ,即啡 2.95mg/ kg 為基礎(chǔ) ,按照逐日遞增原則進(jìn)行。于第 12 次給藥后 3h , 腹腔注射納絡(luò)酮 20mg/ kg 后 ,立即將小鼠置于 3000 mL 燒杯內(nèi) ,觀察注射納絡(luò)酮 10 min 內(nèi)小鼠的跳躍反應(yīng)。通過(guò)小鼠跳躍實(shí)驗(yàn)被確認(rèn)為**成癮者 , 再接受迷宮試驗(yàn) ,符合焦慮標(biāo)準(zhǔn)者即為啡戒斷焦慮模型成功。隨后 6 天只進(jìn)行與針刺組相同的固定和迷宮實(shí)驗(yàn)。

D. 模針組 : 在啡戒斷后焦慮模型基礎(chǔ)上 , 進(jìn)行電針** ; 電針從催癮后當(dāng)天開始進(jìn)行。取三陰交穴。穴位根據(jù)《中國(guó)獸醫(yī)針灸學(xué)》及《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》并結(jié)合人體進(jìn)行參照定位。取穴定位之后 , 以掀針刺于雙側(cè)三陰交 , 接韓氏電針**儀 , 頻率 2 ～100HZ ,電流 0.5～2 mA ,電壓 2～4 V ,以見到小鼠下肢輕微抖動(dòng)為度。每日** 1 次 , 每次** 15 min 。連續(xù)** 6 天 ,并參予迷宮實(shí)驗(yàn)。

E. 單針組 : 不造模 , 只給予同模針組相同的固定、針刺處理和迷宮實(shí)驗(yàn)。各組動(dòng)物在第 6 天迷宮實(shí)驗(yàn)后 ,立即斷頭處死 ,迅速取腦 , 置于 - 30 ℃冰箱冷凍待測(cè)。用熒光法檢測(cè) N E 的含量。

1.2.2 　 T - 迷宮實(shí)驗(yàn)

具體方法為 : 實(shí)驗(yàn)前將每只小鼠放入一個(gè) 60 ×60 × 35cm 宮體中 , 讓其熟悉環(huán)境 5 min 后 , 先置于迷宮的閉臂封閉端 ,頭朝壁 ,觀察者距離迷宮中心1 m 。記錄實(shí)驗(yàn)期 ( 3 min) 內(nèi)小鼠在閉臂滯留時(shí)間(以四肢全部出臂為準(zhǔn)) , 閉臂共測(cè)試 3 次。再將小鼠置于開臂的頂端 , 記錄實(shí)驗(yàn)期 ( 3min) 內(nèi)小鼠在開臂滯留的時(shí)間 ( 以四肢全部出臂為準(zhǔn)) , 開臂測(cè)試 1次。其中 ,在每次測(cè)試結(jié)束后 ,均將小鼠放回塑料盒停留 30 s 后再進(jìn)行下一次測(cè)試。若 3 min 結(jié)束 , 小鼠仍在閉臂和開臂滯留 , 則將小鼠取出 , 計(jì)為 3min 。

測(cè)試時(shí)間為 : 注射納絡(luò)酮催癮后當(dāng)天 ( 電針前) ,**第 3 天和**結(jié)束時(shí) , 共進(jìn)行 3 次迷宮行為學(xué)測(cè)試。實(shí)驗(yàn)在安靜環(huán)境下進(jìn)行。

1.2.3 　實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法

實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)以均數(shù) ±標(biāo)準(zhǔn)差 ( … x ± s) 表示 , 采用 SPSS 10.0 統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行單因素方差分析、 q檢驗(yàn) ( Newman - Keuls 法) 。

2 　結(jié)果

2.1 　電針對(duì)啡戒斷后焦慮小鼠行為學(xué)影響

　　從表 1 得知 , 納絡(luò)酮催癮后 , 模型組和模針組小鼠在第 3 次測(cè)試時(shí)其閉臂滯留時(shí)間長(zhǎng)于迷空組和單針組 ( P < 0.05) , 表明焦慮模型成功 , 接受造模的模型組和模針組小鼠之差異 , 無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 ( P <0.05) , 具有良好的可比性。由表 2 可知 , 接受**3 天后 , 模針組小鼠在第 3 次閉臂滯留時(shí)間短于模

型組 ( P < 0.05 ) , 在開臂的時(shí)間長(zhǎng)于模型組 ( P <0.05) 。單針組與迷空組相比 , 也獲得同樣結(jié)果 ( P< 0.05) , 提示針刺具有抗焦慮的**效應(yīng)。從表 3得知 , 在接受** 6 天后 , 模針組小鼠在閉臂滯留時(shí)間短于模型組 ( P < 0.01 ) , 在開臂的時(shí)間長(zhǎng)于模型組 ( P < 0.01) 。單針組和迷空組相比均比模型組小

鼠在閉臂滯留時(shí)間短 ( P < 0.01 , P < 0.05 ) ; 提示針刺抗焦慮的**效應(yīng) , 隨著**時(shí)間的增加而繼續(xù)維持。

2.2 　針刺對(duì)啡戒斷后焦慮小鼠腦組織 N E 含量的影響。

由表 4 可知 , 模型組小鼠腦內(nèi) N E 含量高于空白組、模針組、單針組 ( P < 0.01 ) 和迷空組 ( P <0.05) ,模針組小鼠腦內(nèi) N E 含量低于模型組 ( P <0.01) , 并接近于空白組 ( P > 0.05) 。 迷空組小鼠腦內(nèi)的 N E 含量高于空白組、單針組和模針組 ( P <0.05) 。

3 　討論

近年來(lái) , 在高架十字迷宮模型基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的新型 T - 迷宮焦慮模型 , 為國(guó)際公認(rèn)和常用的一種小鼠焦慮模型。T - 迷宮小鼠模型 , 它以動(dòng)物自發(fā)行為為基礎(chǔ) ,動(dòng)物不需要特殊訓(xùn)練 ,利用動(dòng)物對(duì)新異環(huán)境的探究特性和對(duì)高懸敞開臂的恐懼心理 , 形成動(dòng)物的矛盾行為 , 以動(dòng)物滯留開臂和閉臂的時(shí)間長(zhǎng)短來(lái)反應(yīng)動(dòng)物的焦慮狀態(tài) , 具有與臨床更為接近的優(yōu)勢(shì)。本實(shí)驗(yàn)以逐日遞增法形成嗎依賴小鼠模型 ,腹腔注射納絡(luò)酮催促戒斷后 ,采用 T - 迷宮篩選焦慮模型小鼠。迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明 , 啡戒斷后小鼠滯留在閉臂的時(shí)間長(zhǎng)于單針組與迷空組 ( P <0.05) , 說(shuō)明戒斷后小鼠已呈現(xiàn)出焦慮狀態(tài) , 提示本實(shí)驗(yàn)造模成功。

在本實(shí)驗(yàn)中 , 觀察到模型組小鼠在迷宮閉臂滯留時(shí)間長(zhǎng)于模針組小鼠 , 在開臂滯留時(shí)間則短于模針組小鼠 ( P < 0.01 ) , 說(shuō)明電針具有抗啡戒斷后焦慮的**效應(yīng)。

劉東亮等認(rèn)為 , 吸食毒濁之氣 , 先為吸而犯肺 ,食而入胃 ,后則郁閉心腦 ,傷及脾、肝、腎、三焦及腸 ,致使五臟閉結(jié) , 毒聚臟腑。楊氏則認(rèn)為 , 長(zhǎng)期吸毒會(huì)導(dǎo)致陰液虧損 ,元?dú)獍岛?nbsp;,氣血虛衰 ,臟腑俱損 ,一旦斷煙 , 則諸癥皆起。總之 , 若肝、脾、腎陰液不足 ,氣血衰少 ,腦髓失去濡養(yǎng) ,導(dǎo)致心神不定 ,心失濡養(yǎng) ,而發(fā)生焦慮。三陰交穴首載于《針灸甲乙經(jīng)》 ,為足太陰脾經(jīng)之穴 , 于足太陰、足厥陰、足少陰三陰經(jīng)交會(huì)之處 ,具有調(diào)肝補(bǔ)脾滋腎之功 ,本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明 ,三陰交穴具有抗啡戒斷后焦慮的**效應(yīng)。

目前學(xué)術(shù)界已公認(rèn) : 啡、***戒斷后焦慮情緒的產(chǎn)生 ,與**多種神經(jīng)系統(tǒng)功能異常變化有關(guān)。其中 : **去甲腎上腺能神經(jīng)元主要接受邊緣系統(tǒng)藍(lán)斑區(qū) N E 核的支配 , 使突觸后受體包括α 1 、 α 2 、 β 1 、β 2 腎上腺受體釋放 N E ,以及藍(lán)斑核的原癌基因 c -fos 表達(dá)明顯增加 , 從而誘發(fā)啡戒斷后焦慮的產(chǎn)生。此外 ,N E 系統(tǒng)參予**戒斷后的焦慮情緒的機(jī)制 ,還可能通過(guò)與多巴胺 ( DA) 和 5 - 羥色胺 ( 5 -HT) 等系統(tǒng)互相調(diào)節(jié)作用而實(shí)現(xiàn)。在本實(shí)驗(yàn)中 , 模型組小鼠腦組織 N E 含量高于其余各組 , 其行為學(xué)表現(xiàn)為焦慮狀態(tài) , 提示 N E 可能直接參與焦慮狀態(tài)的產(chǎn)生。模針組小鼠腦內(nèi) N E 水平低于模型組 , 并接近正常組小鼠 , 說(shuō)明針刺不僅能夠?qū)Ψ冉鋽嗪蠼箲] ,從行為學(xué)方面產(chǎn)生**效應(yīng) ,而且還可能影響** N E 含量 ,降低** N E 神經(jīng)元的興奮性 ,抑制其興奮傳導(dǎo)過(guò)程 , 從而呈現(xiàn)抗焦慮效應(yīng)。但這一作用機(jī)理與其他神經(jīng)遞質(zhì)之間的關(guān)聯(lián)如何 , 還有待于進(jìn)一步研究。